蛋白浓度计算器是美国AAT Bioquest设计的一种在线即时浓度计算工具,以方便研究人员准确、便捷的进行浓度计算。
如果已经知道蛋白分子量和摩尔吸收系数,可以根据比尔-朗伯定律,计算溶液中蛋白的浓度。λmax 指的是吸收最强值所对应的波数,对于蛋白来说,最大吸收波数一般使用 280 nm。最大吸收波长处的吸光率可以通过分光光度仪来测量,在测定蛋白的吸收光谱时需注意以下几项:
1. 蛋白需要溶解完全,任何蛋白的沉淀会给浓度的测量和计算带来偏差。
2. 吸光度的读数不应该超过仪器的量程,导致吸收曲线出现平台。如果出现这种情况,应该稀释蛋白溶液再进行测量。
3. 此蛋白浓度计算式是采用 1cm 标准光程作为基准,应使用 1cm 宽的石英比色皿,如果使用其它尺寸的分光皿,所测的值应予校正。
蛋白浓度计算原理
示意图
注:浓度计算所需的所有数据均根据实际实验及所选蛋白进行调整(消光系数及分子量会根据您在计算工具中的蛋白选择而自行调整)。计算工具链接:https://www.aatbio.com/tools/calculate-protein-concentration
操作步骤
1.选择所要分析的蛋白,如果不是选项中的蛋白,请选择 "custom sequence",然后输入蛋白氨基酸序列。
2.输入最大吸收的波长。蛋白一般最大吸收在 280 nm。但是,不同蛋白有不同的最大吸收波长,请按仪器所测的最大吸收波
长为准,输入最大吸收峰处的波数。
3.如果测量使用的蛋白溶液是已稀释的溶液,请输入稀释的倍数,用以计算蛋白的原始浓度。
4.如果所使用的比色皿的光程不是 1cm,请输入正确的光程。
5.点击 "计算" 后即可显示蛋白浓度。